Monkeypox Virus Real Time PCR Kit

1. NümunəKolleksiya:Nümunə uyğun olaraq steril borulara yığılmalıdır

standart texniki şərtlərlə.

2. Reagent Hazırlanması (Reagent Hazırlama Sahəsi)

Kitin komponentlərini çıxarın, gözləmə rejimində istifadə üçün otaq temperaturunda balanslaşdırın.

3. Nümunə Emalı (Nümunə Emal Sahəsi)

3.1 Nuklein turşusunun çıxarılması

Viral DNT ekstraksiya dəstlərinin müvafiq tələblərinə və prosedurlarına uyğun olaraq nuklein turşusunun çıxarılması üçün 200μL maye nümunələri, Müsbət Nəzarət və Mənfi Nəzarət götürmək tövsiyə olunur.

3.2 Liyofilləşdirilmiş toz həlledici və şablon əlavəsi

Nümunələrin sayına görə Monkeypox Virus Liyofilləşdirilmiş premiks hazırlayın.Bir nümunə üçün Liyofilləşdirilmiş premiks tozu olan bir PCR boru lazımdır.Mənfi nəzarət və müsbət nəzarət iki nümunə kimi qəbul edilməlidir.

(1) Liyofilləşdirilmiş premiks olan hər bir PCR borusuna 15μL Həlledici Məhlul əlavə edin, sonra hər bir PCR borusuna müvafiq olaraq 5μL çıxarılan nümunələr/Mənfi Nəzarət/Müsbət Nəzarət əlavə edin.

(2) PCR borularını möhkəm bağlayın, liyofilləşmiş toz tamamilə həll olunana və qarışdırılana qədər PCR borularını əl ilə sürüşdürün, ani aşağı sürətli sentrifuqa ilə mayeni PCR borularının dibinə yığın.

(3) Əgər aşkarlama üçün ümumi Real-time PCR alətindən istifadə edirsinizsə, o zaman PCR borularını birbaşa gücləndirmə sahəsinə köçürün;aşkar etmək üçün BTK-8 istifadə edirsinizsə, onda aşağıdakı əməliyyatları yerinə yetirmək lazımdır: PZR borusundan BTK-8-in reaksiya çipinə 10 μL maye köçürün.Bir PCR borusu çipdəki bir quyuya uyğun gəlir.Pipetləmə əməliyyatı zamanı pipetin 90 dərəcə şaquli olduğundan əmin olun.Aerozol bariyer pipetinin ucları orta güclə quyunun mərkəzinə yerləşdirilməlidir və pipet birinci sürətə çatdıqda (baloncukların yaranmasının qarşısını almaq üçün) itələməyi dayandırmalıdır.Quyular doldurulduqdan sonra, bütün quyuları örtmək üçün reaksiya çipi membranını çıxarın və çip daha sonra gücləndirmə aşkarlama sahəsinə köçürülür.

4. PCR Gücləndirilməsi (Algılama Sahəsi)

4.1 PCR borularını/reaksiya çipini reaksiya çəninə qoyun və hər bir reaksiya quyusunun adlarını müvafiq qaydada təyin edin.

4.2 Flüoresansın aşkarlanması parametrləri: (1) Monkeypox virusu (FAM);(2) Daxili Nəzarət (CY5).

4.3 Aşağıdakı velosiped protokolunu işə salın

ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio protokolu:

 BTK-8 Protokolu:

5. Nəticələrin təhlili (lütfən, Alətin İstifadəçi Təlimatına baxın)

Reaksiyadan sonra nəticələr avtomatik olaraq yadda saxlanılacaq.Təhlil etmək üçün “Analiz et” üzərinə klikləyin və alət nəticə sütununda hər bir nümunənin Ct dəyərlərini avtomatik şərh edəcək.Mənfi və müsbət nəzarət nəticələri aşağıdakı “6. Keyfiyyətə Nəzarət”ə uyğun olmalıdır.

6. Keyfiyyətə nəzarət

6.1 Mənfi Nəzarət: FAM kanalında Ct və ya Ct>40 yoxdur, normal gücləndirmə əyrisi olan CY5 kanalında Ct≤40.

6.2 Müsbət Nəzarət: Normal gücləndirmə əyrisi olan FAM kanalında Ct≤35, normal gücləndirmə əyrisi olan CY5 kanalında Ct≤40.

6.3 Nəticə yuxarıda göstərilən bütün meyarlara cavab verdikdə etibarlı sayılır.Əks halda, nəticə etibarsızdır.

Nəticənin şərhi

Aşağıdakı nəticələr mümkündür:

QEYD: Etibarsız nəticə baş verərsə, nümunə toplanmalı və yenidən sınaqdan keçirilməlidir.